技术文章
Technical articles
日本Okayama大学的研究者们建立了检测猪丹毒的PCR方法（1999）。常规细菌培养检测猪丹毒至少要3天，鉴定血清型大约要lo天，而这种PCR法可在5h内完成。它使用两步扩增法，先用高度特异性引物组M0101-M0102进行初步扩增之后，再添加4种特异性寡核苷酸引物组对4种不同血清型猪丹毒的16SrRNA序列进行扩增。rRNA基因簇包括16SrRNA、23SrRNA、5SrRNA、下游非编码区。对该簇编码的DNA序列进行测定，以设计种特异性PCR检测系统的引物。猪红斑丹毒丝...
纯化的抗体可通过不同的途径获取，就本书中描述的大多数情况而言，这些抗体可通过下述方法制备或从商家购买。从商家购买的抗体，通常附有正确的储存方法。1．经纯化制备的抗体在常用的缓冲液中是稳定的。其DH应保持在中性左右。如果pH在7-8之间，即使保存多年，对抗体也无损害。多数情况下，盐浓度适于保持在0～150mmol／L之间，但在长期存放的抗体中，盐溶液浓度高达500mmol／L时，对抗体可能有损害。如果没有其他说明．律议用PBS或50mmol／LTris（DH8．0）溶液长期存放...
免疫亲和纯化技术常用于从多克隆抗体样本中纯化抗原特异性抗体。在这个过程中，纯抗原共价结合于固相支持物上，多克隆混合抗体中的那些对该抗原特异的抗体能和它结合。经过冲洗，将未结合的抗体除去，然后再将特异性抗体洗脱。这种方法不适用于单抗，因为它们与抗原结合的活性相同。免疫亲和纯化技术常用于下面两种情况。*种情况是抗肽抗体的制备。在制备抗肽抗体的过程中，要将抗肽抗体所针对的合成肽结合到载体蛋白上，以产生有效的免疫原性。针对肽—载体复合物的多克隆抗体产生后，通常并不能直接使用，而要从血...
[检测方法]ELISA法[方法学原理]将血吸虫可溶性抗原与固相载体联结形成固相抗原，加待检血清，如血清中有特异性抗体则与固相抗原相结合，形成固相抗原抗体复合物；再加HRP标羊抗人IgG抗体，形成固相抗原—抗体—羊抗人IgG酶标记抗体复合物，在此基础上加酶底物显色，颜色深度与抗体含量成正比。[标本准备]不抗凝静脉血2ml[试剂]1．日本分体血吸虫可溶性抗原2．HRP标记羊抗人IgG3．0．05mmol／LpH9．6碳酸盐缓冲液4．稀释液和洗涤液5．酶底物液6．2mol／LH25...
疟疾（malaria）是疟原虫经按蚊叮咬传播的传染病，临床上以间歇性寒战、高热、大汗和脾大、贫血等为特征，恶性疟疾能引起凶险发作。常见检测方法为间接荧光抗体染色法检测疟原虫抗体。[检测方法][方法学原理]抗原片上加患者血清，若血清中含有疟原虫抗体，即可与抗原结合成相应的抗原抗体复合物，此复合物再与荧光标记抗人IgG抗体结合，zui后通过荧光显微镜观察荧光反应。[试剂]1．0．01mol／LpH7．6PBS2．荧光标记抗人IgG抗体3．阴性对照、阳性对照血清4．抗原片[检测步骤...
对于组织培养中生长的细胞，zui有效的裂解方法是用去污剂进行处理。虽然有多种去污剂可用于裂解细胞，但zui常用的是TritonX—100或NP—40等非离子型去污剂。非离子型去污剂能溶解胞质和细胞膜，破坏分子间许多微弱的结合键，并能溶解大部分经常研究的蛋白质抗原，但对于大分子多聚抗原则无效，在大多数情况下该抗原也是难以研究的。浓度介于0．1％～1％的去污剂即可满足几乎所有溶解需求。非离子型去污剂裂解液一般补充等离子浓度的盐和接近中性的pH。在某些情况下，需要较剧烈的抽提条件以...
裂解酵母菌的方法是将玻璃微珠和菌细胞一起涡旋振荡进行机械破碎。此法充分利用玻璃微珠的快速转动撞击酵母菌从而机械破碎裂解酵母细胞。由此可见，这是一种强有力的裂解方法，但在裂解过程中又传输大量的能量，导致样本的变性。因此，和哺乳动物细胞的研究比较，酵母菌的免疫沉淀试验并不是一个好的方法，特别是研究蛋白质的性质和结构时，该方法是不可取的。1．准备工作由于免疫沉淀有多个步骤，且包括数小时孵育，因此在实验开始前必须安排好时间，注意适当利用过夜孵育的间隙。这将有助于决定何时开始裂解细胞。...
目前，我国流行的主要是乙型脑炎和森林脑炎。而在世界各地还有不同类型的病毒性脑炎流行，其病原体为各种不同的虫媒病毒，如属于A组病毒的东方马脑炎、西方马脑炎；属于B组病毒的圣路易脑炎、波瓦生脑炎、苏格兰脑炎等。波瓦生脑炎波瓦生脑炎是由波瓦生脑炎病毒引起的，经蜱传播的中枢神经系统感染的自然疫源性疾病。潜伏期7—14d。起病急，持续高热、头痛，随之出现中枢神经症状及脑膜刺激征，部分病例出现肢体强直或偏瘫。病死率高达50％，发病以儿童多见。本病分布于加拿大、美国和北欧，多发生于夏秋季，...
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