对scFv基因文库及pHEN1噬菌体展示栽体的限制性消化

[器材和试剂]
●NcoI和NotⅠ限制性酶以及厂商的缓冲液3（New England Biolabs）（NEB3缓冲液）
●100×乙酰化牛血清蛋白（BSA）（New England Biolabs，与NotⅠ一起提供）
●37℃孵育箱或者有加热盖的加热器
●GelleClean试剂盒（Qbiogene，Inc．）
●pHENl DNAL8），氯化铯纯化制备
●再扩增的scFv基因文库

[方法]
1，配制两个100ul PCR反应混合液来消化scFV文库，其中1个用于VH-VκscFv文库，另1个用于VH-Vλ scFv文库，该混合液含有：
●scFV DNA（1～4ug），50ul
●水，33ul
●10×NEB 3缓冲液，10ul
●乙酰BSA（100×），1．0ul
●Nco工（10U/ul），3．0f11
●NoJ工（10U/ul），3．0ul
2．37℃孵育反应液过夜。要用37℃孵育箱或者有加热盖的加热装置，防止水分蒸发。或者，可以按PCR反应那样加一层矿物油（Sigma）。
3．用1%琼脂糖胶纯化基因文库，并用Geneclean试剂盒提取DNA。重悬产物于30ul水中。在1%琼脂糖凝胶中，与已知大小和浓度的标准对照品比较，测定DNA浓度。
4．消化4ug氯化铯纯化的pHENl DNA以准备载体，其过程*如上述消化scFv基因文库的流程，但须将scFvDNA替换为质粒DNA②。
5．用0．8%琼脂糖胶纯化已消化的载体DNA，再按处理scFv插入序列的方式，用Gene-clean自胶中提取载体片段。将产物重悬于30ul水中。在1%琼脂糖凝胶中，与已知大小和浓度的标准对照品比较，测定DNA浓度。

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