间接荧光抗体染色法检测疟疾

    [检测方法] 

    [方法学原理]  抗原片上加患者血清，若血清中含有疟原虫抗体，即可与抗原结合成相应的抗原抗体复合物，此复合物再与荧光标记抗人IgG抗体结合，zui后通过荧光显微镜观察荧光反应。

    [试剂]

    1．0．01mol／LpH7．6 PBS

    2．荧光标记抗人IgG抗体

    3．阴性对照、阳性对照血清

    4．抗原片

    [检测步骤]

    1．用铅笔将抗原片（厚血膜）划成12个小格，放置蒸馏水中浸泡2～3min，以脱去血红蛋白，吹干。

    2．用无水乙醇固定10min，吹干。

    3．将被检血清用PBS从1：10开始作倍比稀释，将此稀释血清分别加在小格中，每格1小滴，同时设阳性对照和阴性对照。

    4．将抗原片放湿盒中置37C环境中孵育30min，弃去残余血清，用PBS洗3次，每次3min，用蒸馏水漂洗一遍以脱盐，吹干。

    5．将已稀释的荧光标记抗人IgG抗体加于各小格中心，每格1小滴，同上孵育，漂洗吹干，荧光显微镜检。

    [结果判断]  阳性结果小格内有与原虫胞浆结构相似的明亮荧光；阴性结果原虫胞浆结构模糊无荧光。阴阳性对照结果无误，实验成立。

    [正常参考值]  正常人抗体效价≤1：10，但疟疾流行区的正常人（成人）抗体效价稍高。

    [注意事项]

    1．具有较多裂殖体的血片，阳性检出率高，因为疟原虫的裂殖体的抗原性zui强。

    2．采用厚血膜做抗原片时，经溶血后疟原虫容易变形，故观察结果时要认真辨认（必要时可做瑞氏染色对照）以排除非特异性荧光。

    3．加被检血清时，要防止互相串格。

    [临床意义]  被检血清≥1：20阳性，表明疟原虫感染。流行区人们抗体阳性检出率较高。有学者报道患者抗体阳性率为55．1％，明显高于血膜染色检查法（阳性率28．1％）。间日疟患者经*后荧光抗体的阳性率迅速下降。值得注意的是，已*10余年的人群中尚有8％的人存在低滴度抗体水平。由此可见，本试验结果阳性的意义不在于诊断，而在于流行病学调查。