用于染色的培养细胞既可以是贴壁细胞,也可以是悬浮细胞。贴壁细胞通常使其生长在合适的固相支持物上;悬浮细胞可以直接固定,也可以通过甩片或使用化学黏合剂黏附在固相支持物上。
(一)贴壁细胞
贴壁细胞的准备比较简单,可以使其生长于适当的载玻片、盖玻片或塑料组织培养皿中。如果实验要求高分辨率或需拍照,细胞应生长于载玻片或盖玻片上;如果实验的分辨率要求不高,或者是大量样品的筛选,可使细胞生长于塑料组织培养皿中。
将贴壁细胞生长在固相支持物上有其*的优点,操作步骤,如冲洗、固定、通透及染色均较简单易行,便于同时进行大量不同种类细胞、不同抗体及不同条件下的操作。
(二)悬浮细胞
悬浮细胞的制备可以采用多种不同的方法。如果是进行细胞内部抗原的定位,一般可用甩片机将细胞甩在一张载玻片上,也可以先用带电的交联剂涂在盖玻片上,然后再将细胞黏附于盖玻片上。此后的操作步骤与贴壁细胞相同。
在某些情况下,细胞可在悬浮状态下染色。这是因为在其后的操作步骤中,需要细胞在悬浮状态下进行,例如细胞分选。在悬浮状态下处理细胞更加繁琐,因为每一洗涤步骤均须离心、再悬浮细胞。