本实验是以质体pBluescript II SK（-） 为材?，以?同限制酶作用，经电泳分离DNA片段后，比较各DNA片段的泳动?与分子?，藉此练习限制酶的使用、电泳分析及简?DNA限制图谱 （restriction map） 的建?。 以DNA操作为主的各项实验必须维持溶液与容器?受核酸分解酵素污染，因此请同学遵守以下原则并养成习惯：
a. 请随时保持实验桌的清洁。
b. 微?移液器头及微?离心管取出后?即将盖子盖上。
c. 请勿用手触摸灭过菌的微?移液器头、微?离心管及各种容器的内部。
d. 溶液打开后，盖子请勿随意置放。吸取各种溶液请使用灭过菌的微?移液器头；Pipetman 要保持垂直，?要碰到容器壁；每次吸出溶液后，请?即将盖子盖上。
仪器用具：
37℃及65℃水浴或恒温槽
药品试剂：
质体pBluescript II SK （-）
限制酶：BamHI, PvuII 及ScaI （浓?均为10 units/μL, Invitrogen）
10×Reaction buffer 6 （0.5 M Tris-HCl, pH 7.4; 60 mM MgCl2; 0.5 M NaCl; 0.5 M KCl）
无菌水
方法步骤：
1） 取7 支微?离心管，依下表所?体积 （单位 μL） 依序加于管壁?同位置上。
◆ 每次吸取限制酶时，请换一支新的微?移液器头以免造成污染。
总体积为20 μL，短暂离心后，以微?移液器头轻轻混合，#1 置冰浴中，其余各管置于37℃反应1 h。
2） 置65℃水浴15 min 中止反应后，移置冰浴?却，即可进?电泳分析。
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更新时间：2012-09-07
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