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酶联免疫吸附试验(ELlSA)鉴定新城疫

更新时间:2012-03-21点击次数:1514

 ELISA是目前应用zui广泛的一种免疫学测定方法。它是以物理方法将抗体或抗原吸附在固相载体上进行的免疫酶测定试验。·ELlSA检测NDV抗原是研究zui多进展zui快的技术,各种EL/SA在NDV抗原检测及抗体测中得到广泛应用。康吉克孜等用ELISA抗原试剂盒对经NDVF48E8强毒株攻击后发病致死鸡的内脏样品、泄殖腔棉拭和自然发病鸡的口腔、泄殖腔、嗦囊棉拭进行了检测,结果表明该试剂盒快速特异,并可同时检出大量样品。

P.Ramadass等用山羊抗兔辣根过氧化物酶结合物以Dot-ELISA法对禽粪便和组织悬液样品进行NDV的检侧,仅需30rain就能完成试验,并且其灵敏度与间接荧光抗体试验相似。

曹殿军等用辣根过氧化衔酶

于圣青等从10株抗鸡NDV特异性单克隆抗体中筛选出2株,分别用作包被抗体和酶标抗体而建立的McAbs—夹心ELISA试验,对提纯NDV的zui小检出量为25ng/ml病毒蛋白,并从临床疑似ND的724只病鸡的口腔棉拭样品中共检出阳性502只,其中800个样品与病毒分离试验结果*一致。

卢建红等以抗NDV单抗夹心ELISA试验为基础,建立了PEG-ELISA法,并用于临床诊断样品NDV的检测,结果·PEG—ELISA法的检出率比McAbs夹心ELISA法提高了3%。

吴红专等用HRP标记F23单抗制备的单抗ELISA试剂盒,在华东地区部分鸡场进行NDV强毒感染的监测结果表明该试剂盒的监测结果与病毒分离的阳性符合率为100%,阴性符合率为96.7%。

高云英等用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶与单克隆抗体制备结合物对NDV强毒感染濒死鸡的5种组织脏器以双抗夹心ELISA法进行NDV抗原检测,检出率均在80%以上,与直接荧光抗体试验比较,对人工感染病例的检出符合率为100%,且具有敏感性高、特异性强、快速简便等优点。

另外ELISA法也用于ND抗体的监测,姜平等应用dot—ELISA检测ND血清,并与常规ELISA、HI法相比较,结果表明,该法用于ND抗体检测,其特异性和敏感性均优于常规ELlSA和HI,且克服了常规ELISA设备要求昂贵和HI敏感性低等缺点。

ELISA法虽然存在着试剂纯度和酶结合物的特异性、结果阳性判定标准的确定等问题有待解决,但由上述可见,其与单克隆抗体相结合并标准化、试剂盒化,已成为临床上ND诊断和监测的一个重要发展方向。

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